中壓層析柱是利用生物分子間所具有純化技術(shù),它是利用生物分子間存在的特異性相互作用,通過將具有親和力的兩個分子中的一個固定在不溶性基質(zhì)上,利用分子間親和力的特異性和可逆性,對另一個分子進(jìn)行分離純化。
中壓層析柱的操作步驟:
1 準(zhǔn) 備
在裝柱前,建議采用靜置沉淀法,確定膠懸液濃度,我們的填料是以50%的濃度儲存在20%的乙醇中。
2 檢 查
裝柱需借助裝柱系統(tǒng)完成,所有的組件必須處于完好的狀態(tài),檢查玻璃部件,特別注意端部,應(yīng)更換末端有缺口的柱子。
3 清 洗
柱子和裝柱器在使用前,應(yīng)用20%乙醇潤洗,檢查篩板,確保所選篩板的孔徑和所選填料的粒徑相匹配,確保底端部件和頂部適配器的管件連接牢固。
4 安 裝
1) 柱子用柱夾或鐵架臺固定,確保柱管沒有傾斜,垂直于地面,避免裝好的柱子出現(xiàn)寬泛而彎曲的條帶。
2)向柱中加入蒸餾水或20%乙醇至幾厘米的高度,利用重力作用讓柱中液體從底端管線中流出,排出氣泡,在柱底預(yù)留至少1厘米高度的液體,并用堵頭連接管線的錐形接頭。
3)再次混勻膠懸液,確保懸液均一,借助玻璃棒將膠懸液盡可能一次性貼壁倒入柱管中,用裝柱緩沖液加滿柱管。
4)將適配器管線連接注射器,排出適配器管線中的氣泡。逆時針旋轉(zhuǎn)調(diào)節(jié)帽將固定帽、調(diào)節(jié)帽旋轉(zhuǎn)至調(diào)節(jié)桿最底端。
5)打開底部管線堵頭,將適配器垂直放在玻璃管上,順時針擰緊固定帽,請確保整個操作在一條直線上完成。注意不要引入氣泡。
6)按照填料說明書推薦的流速運(yùn)行設(shè)備,不同的填料推薦的裝柱流速不同,很多填料會需要分2個階段進(jìn)行裝柱,第一步用推薦流速加快沉降,第二步用更高的流速(不超過推薦流速的30%)壓實(shí)填料,請在流速開啟前閱讀填料說明書。繼續(xù)運(yùn)行至膠面穩(wěn)定,讀取刻度并記錄。
7)停止設(shè)備流速,將適配器順時針向下擰至讀取刻度下2~3mm,繼續(xù)運(yùn)行流速,如果膠面發(fā)生改變,可以重新調(diào)節(jié)適配器高度。裝柱完成。